Reportergen

Et reportergen er et gen som kan brukes til å spore ekspresjon av andre gener. Reportergenet blir vanligvis introdusert under samme promoter etter at genet skal undersøkes . I noen tilfeller er aktiviteten til selve promoteren også av interesse, uten et målgen. Et reporterenzym , et fluorescerende reporterprotein eller et påvisbart antigen blir noen ganger også uttrykt som et fusjonsprotein . Fluorescerende reportergener er spesielt viktige i fluorescensmikroskopi .

Kjente reportersystemer

den cat -genet, som koder for et kloramfenikol-acetyltransferase (CAT)
de GFP -genet fra Aequorea Victoria , koder for et grønt fluorescerende protein (GFP)
den GusA genet fra Escherichia coli , koder for en β-glukuronidase (GUS) (tidligere kjent som uidA -genet)
den lacZ -genet fra Escherichia coli , koder for en β-galaktosidase (β-Gal), hovedsakelig for blått-hvitt valg
de luciferase gener fra Photinus pyralis og Renilla reniformis kode for Bioluminescens enzymer
luciferasegenet fra Oplophorus gracilirostris , en dypvannsreke , koder for et bioluminescerende enzym; NanoLuc er den genetisk optimaliserte 19 kD underenheten av Oploporus luciferase
Gaussia luciferase genet fra Gaussia princeps , en copepod , koder for et bioluminescerende enzym
den aequorin genet fra bioluminescent manet av den slekten Aequorea , koder for et fotoprotein som er brukt som et kalsium-sensor
den phoA -genet fra Escherichia coli , koder for en alkalisk fosfatase (AP)

CDNAene for disse proteinene blir klonet i egnede ekspressjonsvektorer i de tilsvarende reporter-systemene .

Eksempel fra plantefysiologi

CDNA-sekvensen til β-glukuronidase (GUS) enzymet blir tilsatt etter promotorsekvensen til genet som skal undersøkes, og deretter transformert til en plante. Avhengig av type promotor, blir glukuronidas deretter uttrykt i forskjellige celletyper, utviklingstrinn eller miljøforhold, noe som gir et blått fargestoff etter tilsetning av det kunstige fargeløse substratet X-Gluc . Med dette systemet kan man spore genekspresjon på organ-, vevs- og cellenivå.

litteratur

SR Kain & S. Ganguly: Oversikt over genetiske reportersystemer. I: Gjeldende protokoller i molekylærbiologi. Mai 2001; Kapittel 9: Enhet 9.6 PMID 18265284
HA Shuman & TJ Silhavy: Kunsten og utformingen av genetiske skjermer: Escherichia coli. I: Nat. Pastor Genet. Volum 4 2003, s. 419-31. PMID 12776212

Se også

Markørgen

Individuelle bevis

↑ Bat-Erdene Jugder, Jeffrey Welch, Nady Braidy, Christopher P. Marquis: Konstruksjon og bruk av aCupriavidus necatorH16 løselig hydrogenase promoter (PSH) fusjon togfp (grønt fluorescerende protein) . I: PeerJ . teip 4 , 26. juli 2016, ISSN 2167-8359 , doi : 10.7717 / peerj.2269 ( peerj.com [åpnet 1. november 2017]).
↑ MP Hall, J. Uendr, BF Binkowski, MP dalen, BL Butler, MG Wood, P. Otto, K. Zimmerman, G. Vidugiris, T. Machleidt, MB Robers, HA Benink, CT Eggers, MR Slater, PL Meisenheimer , DH Klaubert, F. Fan, LP Encell, KV Wood: Konstruert luciferase-reporter fra en dyphavsreke som bruker et nytt imidazopyrazinonsubstrat. I: ACS kjemisk biologi. Volum 7, nummer 11, november 2012, s. 1848-1857, doi: 10.1021 / cb3002478 . PMID 22894855 , PMC 3501149 (fri fulltekst).
↑ BA Tannous, DE Kim, JL Fernandez, R. Weissleder, XO Breakefield: kodonoptimalisert Gaussia luciferase cDNA for mammalsk genekspresjon i kultur og in vivo. I: Molekylær terapi: tidsskriftet til American Society of Gene Therapy. Volum 11, nummer 3, mars 2005, s. 435-443, doi: 10.1016 / j.ymthe.2004.10.016 . PMID 15727940 .
Tan H. Tanahashi, T. Ito, S. Inouye, FI Tsuji, Y. Sakaki: Photoprotein aequorin: brukes som reporterenzym i å studere genekspresjon i pattedyrceller. I: Gener. Volum 96, nummer 2, desember 1990, s. 249-255. PMID 2269434 .

[1] Bat-Erdene Jugder, Jeffrey Welch, Nady Braidy, Christopher P. Marquis: Konstruksjon og bruk av aCupriavidus necatorH16 løselig hydrogenase promoter (PSH) fusjon togfp (grønt fluorescerende protein) . I: PeerJ . teip 4 , 26. juli 2016, ISSN 2167-8359 , doi : 10.7717 / peerj.2269 ( peerj.com [åpnet 1. november 2017]).

[PMID22894855-2] MP Hall, J. Uendr, BF Binkowski, MP dalen, BL Butler, MG Wood, P. Otto, K. Zimmerman, G. Vidugiris, T. Machleidt, MB Robers, HA Benink, CT Eggers, MR Slater, PL Meisenheimer , DH Klaubert, F. Fan, LP Encell, KV Wood: Konstruert luciferase-reporter fra en dyphavsreke som bruker et nytt imidazopyrazinonsubstrat. I: ACS kjemisk biologi. Volum 7, nummer 11, november 2012, s. 1848-1857, doi: 10.1021 / cb3002478 . PMID 22894855 , PMC 3501149 (fri fulltekst).

[PMID15727940-3] BA Tannous, DE Kim, JL Fernandez, R. Weissleder, XO Breakefield: kodonoptimalisert Gaussia luciferase cDNA for mammalsk genekspresjon i kultur og in vivo. I: Molekylær terapi: tidsskriftet til American Society of Gene Therapy. Volum 11, nummer 3, mars 2005, s. 435-443, doi: 10.1016 / j.ymthe.2004.10.016 . PMID 15727940 .

[PMID2269434-4] Tan H. Tanahashi, T. Ito, S. Inouye, FI Tsuji, Y. Sakaki: Photoprotein aequorin: brukes som reporterenzym i å studere genekspresjon i pattedyrceller. I: Gener. Volum 96, nummer 2, desember 1990, s. 249-255. PMID 2269434 .

Languages