Mikrotom

En mikrotom (fra gamle greske μικρός mikros "små" og τομή Tomé "skjæring, skjæring") er en kutteanordning som kan brukes til å lage meget tynne snitt. Den brukes til å produsere mikroskopiske prøver som senere skal røntgen (f.eks. Biologisk vev ). Typiske bruksområder er hovedsakelig myke materialer og materialer , for eksempel innen medisin og biologi ( Histotechnik ), samt analyse av plast. Biologisk materiale herdes normalt ved fiksering før skjæring og deretter kuttes ved å "innstøpe", dvs. inkludering med et flytende stoff ( parafin , syntetisk harpiks ) som senere stivner. Ulike typer mikrotomer (se nedenfor ) er tilgjengelige for å lage seksjonene, avhengig av applikasjonsområdet . Tykkelsen på kuttene er betydelig mindre enn diameteren på et menneskehår og er typisk 0,1 til 100 um. Bruken av en mikrotom kalles en mikrotomi .

Alternative metoder for produksjon av tynne prøver er produksjon av tynne seksjoner for metaller, bergarter, mineraler, bein og tenner, elektropolering for metaller og ionetynning .

historie

Mikrotom fra Cummings 1770

Microtome (C. Reichert, Wien, 1905–1915)

Roterende mikrotom eldre design

Kutt av en fugl

For å forstå strukturen til et objekt, må man undersøke dets indre. I de tidlige dagene med lysmikroskopi ble håndskjær laget med barberblad, hovedsakelig fra planter eller deler av dyr. For å gjenkjenne strukturene til et objekt veldig presist, kreves veldig tynne, jevne kutt i størrelsesorden 10 til 100 µm, som kan undersøkes i overført lys. Enhetene for å lage seksjoner ble kalt kappemotorer frem til 1839 , da Jacques Louis Vincent (1770–1841) og Charles Louis Chevalier (1804–1859) laget begrepet “mikrotom”.

Sannsynligvis den første enheten for å lage slike kutt ble laget rundt 1770 av George Adams, jr. (1750–1795) oppfunnet og videreutviklet av Alexander Cumming . Det var en håndholdt modell der prøven ble holdt i en sylinder og seksjonstykkelsen (høyden på prøven) ble satt med en skrue. I 1835 konverterte Andrew Pritchard kutteren til en bordmodell ved å feste den til et bord med en klemme og dermed kunne betjene kniven med begge hender.

Den første pulkemikrotomen ble oppfunnet av George Adams i 1798 (?). Utviklingen av den roterende mikrotomen skjedde imidlertid mye senere (1883 og 1886).

For å kunne produsere tynne kutt, ble andre hjelpemidler som den dobbelbladede kniven med justerbar bladavstand utviklet av Gabriel Gustav Valentin i 1838 . På grunn av herdeteknikken til biologiske prøver og mekaniske problemer (stabilitet og omslipbarhet til knivene), førte ikke denne åpenbare løsningen, en dobbeltbladkniv, til ønsket suksess med frihåndsdrift.

Noen kilder hevder at mikrotomen ble oppfunnet av den tsjekkiske fysiologen Jan Evangelista Purkyně . Det rapporteres flere ganger at Purkinje var den første til å bruke mikrotomen, uten å oppgi noen datoer. (Se også Jan Evangelista Purkyně # Vitenskapelige forskningsområder ).

Purkinje selv skriver imidlertid i et essay fra 1842: “Det er gjort flere ganger forsøk på å oppfinne komplekse mikrotomer for å oppnå og multiplisere de fineste delene.” Han beskriver et “arbeid om mikroskopet” av Chevalier der Adams (1770 ) som oppfinner og Cumming blir kalt mikrotomenes fullkommenhet, så vel som "endelig Custences nyere tid, som sannsynligvis lite varsel har kommet til Tyskland". Purkinje fortsetter: “Her i Wroclaw, Dr. I en periode var Oschatz veldig opptatt med å bygge og perfeksjonere slike instrumenter. Til slutt laget den lokale dyktige Mechanicus Rösselt en basert på sin egen idé. Disse instrumentene kan være ganske anvendelige for rask fabrikkreplikering av suiter, eller til og med av samme tverrsnitt som fytotomiske preparater, når bruken av dem bør bli mer utbredt, virker de mindre egnet for faktisk forskning, fordi det tar for lang tid å fikse gjenstandene , og må gjentas for ofte for at en undersøkelse beveger seg i alle retninger. "

Videre blir anatomisten Wilhelm His (1865) tidvis sett i litteraturen som oppfinneren av mikrotomen . I beskrivelsen av en mikrotom fra 1870 skriver His: «Enheten tillot meg å jobbe med presisjon som aldri ville vært mulig med enhånds snitt. Han gjorde det mulig for meg å få uavbrutt skjæringssekvens av de undersøkte objektene. ” Samtidig opplyser han imidlertid at (i litteraturen) har det (allerede) blitt spesifisert en rekke enheter for å lage mikroskopiske snitt og at hans enheten er en forlengelse av en tverrgående kutter av professor Hensen. Årsaken til å bli kåret til oppfinneren kan være at Wilhelm His bidro betydelig til den brede aksept av enheten med sitt arbeid.

Sammen med mikrotomene fortsatte forberedelsesteknikken - bestående av fikseringsteknikk, innstøping og farging av prøver - å utvikle seg. Den selektive fargingen av prøven fører bare til nyttige resultater hvis prøvetykkelsen forblir konstant. Dette forhindret at forskjeller i tykkelse førte til større fargeendringer enn forskjeller i prøvestrukturen. Opprettelsen av veldig tynne og fremfor alt jevnt tykke seksjoner med en mikrotom, sammen med selektiv farging av visse cellekomponenter eller molekyler, økte synligheten av mikroskopiske detaljer med minst en størrelsesorden på slutten av 1800-tallet.

På 1870-tallet utviklet Richard Thoma (lege) en enhet for å produsere tynne histologiske parafinseksjoner for mikroskopisk undersøkelse. Denne pulkemikrotomen ble masseprodusert av Rudolf Jung i Heidelberg fra 1881 og ble brukt over hele verden til midten av 1900-tallet (Thoma microtome). Andre produsenter av mikrotomer var selskapene C. Reichert, Wien og E. Leitz , Wetzlar, hvis respektive forretningsområder nå er slått sammen til Leica Microsystems GmbH , Wetzlar.

En detaljert avhandling om mikrotomens historie finner du i gjennomgangen av Gilbert Morgan Smith . Det er også mange historiske bilder av de tidlige enhetene. Basert på dette, gir Krause et eurosentrisk blikk på mikrotomens historie.

Mekaniske mikrotomer

De fleste mikrotomer består av en knivblokk med en utskiftbar kniv, en prøveholder med en prøve og en "matemekanisme". Avhengig av enhetstype, flyttes prøven eller kniven under skjæring, kniven presses gjennom prøven og skjærer av et vaffetynt lag på grunn av kileffekten (snittutvinning). Etter hvert kutt sørger matemekanismen for et automatisk skifte, den såkalte innmatingen, slik at et kutt av samme tykkelse opprettes i neste syklus. Seksjonstykkelsen kan reguleres nøyaktig ved hjelp av en tilsvarende justeringsmekanisme.

Ulike enhetstyper skiller seg ut avhengig av strukturen. De viktigste typene er beskrevet nedenfor. De angitte snitttykkelsene er orienteringsverdier. Den passende snittetykkelsen avhenger av materialet i prøven, undersøkelsesmålet og forbehandlingen (fiksering, innstøping, histoteknologi).

Sledermikrotom

Detalj av sledemikrotomen: slede med kniv (forgrunn); kutt prøve (bakgrunn)

Sledemikrotom med fast prøve og bevegelig kniv

Når det gjelder sledemikrotomen, er prøven vanligvis festet fast på en blokkbærer, mens kniven beveges frem og tilbake på en stort sett tung "slede". I dag er lysbildet på et belte montert på ruller. Med mange glidemikrotomer kan kniven vippes til skjæreretningen. Denne vinkelen er kjent som deklinasjon . Denne orienteringen reduserer trykket ved skjæring sammenlignet med en kniv som er plassert på tvers. Typiske bruksområder er store, myke prøver, f.eks. B. biologiske preparater innebygd i parafin. Den typiske snittetykkelsen til sledemikrotomen er 1 til 60 µm (muligens opptil 300 µm).

Alternativt brukes en variant av sledemikrotomen noen ganger, som blir referert til som den basiske sledemikrotomen . Her er kniven stivt festet og prøven blir trukket gjennom på glidebanen under kniven.

Roterende mikrotom

Roterende mikrotom med svinghjul (høyre)

Instrumentene av denne typen er også kjent som minot mikrotomer. Selv om de drives av en roterende bevegelse, blir dette omgjort til en rett bevegelse, slik at den faktiske skjærebevegelsen (som utføres her av objektet) består av en enkel bevegelse oppover og nedover. Når det gjelder en roterende mikrotom, er kniven vanligvis arrangert horisontalt og stasjonært.

Prinsipp for prøvebevegelse når du lager et snitt på en roterende mikrotom

Det grunnleggende prinsippet for en skjæreprosess er forklart i skissen nedenfor. Prøveholderens nedadgående bevegelse skyver kniven gjennom prøven (posisjon 1 til posisjon 2). Den tynne delen er da på kniven. Etter at kuttet er gjort, trekkes prøveholderen litt tilbake slik at prøven ikke drar langs kniven under den oppovergående bevegelsen som nå følger. På det høyeste punktet i bevegelsen leveres prøven, det vil si at prøveholderen nå flyttes fremover så langt at en tynn seksjon av samme snitttykkelse opprettes under neste bevegelse nedover. Kuttet kan enten fjernes enkeltvis fra kniven, eller du venter til flere påfølgende kutt har stilt opp for å danne et skjærebånd og deretter ta dem av som et bånd (se bildet til høyre).

Svinghjulet kan dreies for hånd på mange mikrotomer. Det har også fordelen at det blir gjort et rent kutt fordi svinghjulets relativt store masse betyr at forskjeller i hardheten til prøven ikke umiddelbart fører til signifikante hastighetsendringer i kuttet. Det roterende svinghjulet er også integrert i huset på noen nyere modeller. Den typiske snitttykkelsen til den roterende mikrotomen er 1 til 60 µm (muligens opptil 300 µm). For harde materialer (f.eks. Innstøping i syntetiske harpikser) er halvtynne kutt med en tykkelse i området 0,5 µm mulig med godt utstyr.

Frysende mikrotom

Kryostat for histoteknologi

For seksjonering av frosne prøver kan mange roterende mikrotomer omdannes til en såkalt frysing eller kryomikrotom ved å tilpasse et kammer avkjølt med flytende nitrogen (prøven er praktisk talt i en fryser med åpen topp under snitting). Den lave temperaturen brukes til å øke hardheten til prøven og dermed gjøre den i stand til å kutte. Dette påvirker hovedsakelig enheter som er egnet for ultramikrotomi eller for halvtynne snitt. Når du oppretter seksjonene, må både prøvetemperaturen og knivtemperaturen reguleres og optimaliseres for prøvematerialet og seksjonstykkelsen.

I tillegg er det også kryostater i histoteknologi som er optimalisert for raske vevssnitt og der den komplette mikrotomen er plassert i kjølekammeret. Alle arbeidstrinn fra hurtigfrysing til kutting til montering på et lysbilde foregår i enheten.

Ultramicrotome

Skjærebånd ca. 16 fjernet ultratynne kutt (ca. 70 nm tykk) på vannoverflaten til en diamantkniv

Ultramicrotome for kutting av harpiksinnebygde prøver for lys- og elektronmikroskopi

En ultramikrotom brukes til å produsere ekstremt tynne seksjoner og fungerer som en "normal" roterende mikrotom, men mekanikken er designet for en veldig fin mating. I stedet for en mekanisk mating brukes også en mating gjennom den kontrollerte lineære utvidelsen av prøveholderen ved hjelp av oppvarming. Slike ekstremt tynne seksjoner er hovedsakelig nødvendige for undersøkelser med overføringselektronmikroskop , og sjeldnere for lysoptiske mikroskoper . Den typiske tykkelsen på et kutt er mellom 10 og 500  nm . På grunn av den lille tykkelsen på kuttene, er det vanskelig å fjerne dem direkte fra kniven. Derfor blir kuttene vanligvis kuttet på overflaten av en væske (f.eks. Vann) og deretter fisket av. Seksjonens tykkelse og ensartethet kan estimeres ved hjelp av interferensfarger.

Vibratome

Med vibratomer genereres skjæreeffekten av et vibrerende blad (f.eks. Barberblad). Kuttet er laget mindre av trykk enn av bladets bevegelser sideveis. Vibratome brukes hovedsakelig til ubehandlede biologiske prøver. På grunn av den lavere mekaniske belastningen er det ikke nødvendig å legge prøven inn. På grunn av vibrasjonene er imidlertid snittbildet vanligvis betydelig dårligere enn med de førstnevnte mikrotomtypene. Seksjonstykkelsen er over 30 µm.

Så mikrotom

Sagmikrotomen er spesielt egnet for veldig hardt materiale som f.eks B. ben og tenner egnet. Med mikrotomer av denne typen roterer en diamantbelagt sag med indre diameter, som sliper gjennom prøven på en definert avstand. Minste snittetykkelse er over 30 µm og muliggjør derfor bare relativt grove kutt.

Laser mikrotom

Lasermikrotomen er et instrument for berøringsfri kutting av prøver. I tillegg til de konvensjonelle anvendelsene av mikrotomer, er det spesielt egnet for å kutte biologiske vev i sin opprinnelige tilstand (f.eks. Lever, nyre, hud, etc.). Det er ikke nødvendig å forberede prøvene ved å legge inn, fryse eller fiksere kjemikalier. Dette unngår i stor grad dannelsen av gjenstander . På den annen side kan veldig harde materialer som bein og tenner eller til og med keramikk bli "kuttet". Avhengig av egenskapene til prøvematerialet er snitttykkelser på 10 til 100 µm for tiden  mulig.

Prinsipp for lasermikrotomen

I motsetning til mekanisk fungerende mikrotomer brukes en ultrakort pulslaser her som skjæreverktøy. Laseren avgir stråling i det nærmeste infrarøde området . I dette bølgelengdeområdet kan laseren trenge gjennom biologisk vev, men også andre materialer, opp til en viss dybde uten synlig skade. Et sterkt fokus i det indre av prøven resulterer i svært høye intensiteter på over en TW / cm² i fokuspunktet . De resulterende ikke-lineære interaksjonene fører til det som er kjent som et optisk gjennombrudd, som induserer en materialseparasjon som er begrenset til fokus. Denne prosessen er også kjent som fotodisrupsjon. På grunn av den korte pulsvarigheten på noen få femtosekunder (1 fs = ^10-15  s), blir det bare avsatt en veldig liten mengde energi i området noen få nanojouler i prøven per puls . Dette begrenser interaksjonssonen til en diameter på mindre enn ett mikrometer. Utenfor denne sonen oppstår ingen termisk skade på grunn av de ultrakorte interaksjonstidene.

Laserstrålen avbøyes av et hurtigskannerspeil mens en tredimensjonal posisjoneringsenhet samtidig beveger prøven frem og tilbake. I kombinasjon med høy repetisjonsfrekvens, gjør denne prosedyren det mulig å skanne større områder innen kort tid.

I tillegg til lasermikrotomen er det også lasermikrodisseksjon for å skjære ut områder i en vevsseksjon, celleutstryk etc. eller for å sortere små partikler.

Mikrotomkniv

Hvilken type mikrotomkniv som brukes, avhenger av materialet og forbehandlingen av prøven, samt testmålet (f.eks. Snittetykkelse).

Knivtyper og typer sliping

Tverrsnittsform av mikrotomkniver med forskjellige typer kutt

Relativt tunge stålkniver eller hardmetallkniver med tykk rygg og med forskjellige former (profil), som vanligvis er identifisert med bokstavene A, B, C og D, brukes tradisjonelt. Mikrotomknivene av kuttet type A og B er ekstremt skarpe på grunn av den plano-konkave formen, men er også veldig følsomme og er derfor kun egnet for veldig myke prøver som parafin eller skummet materiale. Kileformen til type C-kuttet er mye mer stabil og brukes derfor også til noe hardere materialer som syntetisk harpiks eller til frosne kutt. Med knivtypen med form D blir bare den ene siden av kniven skjerpet. Den fremre slipevinkelen på ca. 45 ° øker stabiliteten igjen, men gjør også kniven mye sløv. Denne knivformen brukes bare til hardere materialer.

I stedet for disse klassiske mikrotomknivene z. B. brukte ofte engangsblad for å spare kostnader. Noen av disse er litt sløvere enn de klassiske mikrotomknivene, men fremfor alt er de betydelig tynnere og derfor mer fleksible. Når det gjelder hardere prøver, kan kniven derfor vibrere og dermed svingninger i lagtykkelsen i kuttet. Engangsblad brukes derfor hovedsakelig til mykere materialer.

Glass- eller diamantkniver kreves for ultramikrotomer. På noen få millimeter er skjærebredden til slike kniver betydelig mindre enn for klassiske mikrotomkniver. Glasskniver er laget av glassstenger som er noen millimeter tykke ved å knekke dem rett før bruk. Dette skaper en ekstremt glatt og skarp bruddkant på den smale siden av glasset, som er brutt i trekanter. Glasskniver brukes vanligvis til å skjære prøven på forhånd (beskjæring). De kan suppleres med et lite kummer som er fylt med vann, for eksempel med teip. Som med diamantkniver, kan de enkelte kuttene flyte på vannoverflaten.

Knivens skarphet og hardhet er avgjørende for et godt resultat. Stumpe kniver av stål er skjerpet med spesielle slipende pastaer som inneholder diamantpartikler. Det er spesielle slipeapparater for dette. Håndsliping på slipebånd og pinner er også mulig, men krever mye erfaring.

Skjærevinkel: tilbøyelighet og tilbøyelighet

Definisjon av begrepet deklinasjon i mikrotomi

Den deklinasjon er vinkelen mellom retningen av knivkanten og retningen av kuttet (se figuren til høyre). Med mange lysbildemikrotomer kan den stilles inn mellom 90 ° og 160 °. Hvis kniven er plassert på tvers (deklinasjon = 90 °), blir kuttet bare ved å skyve kniven gjennom prøven. Kreftene som virker på kniven er betydelig større enn når kniven er orientert i en vinkel i forhold til skjæreretningen (deklinasjon 120 ° til 160 °). I sistnevnte tilfelle letter en relativ bevegelse med et parti parallelt med knivkanten kuttet. Denne innstillingen brukes spesielt for store og harde materialer. Fordelen med den tverrgående varianten er at det med passende materiale kan opprettes skjærebånd (flere kutt på rad).

Definisjon av begrepet tilbøyelighet i mikrotomi

Den helling av kniven til prøveplanet Denne vinkelen må velges riktig for et optimalt kutteresultat. Det avhenger av den eksakte knivgeometrien, prøven, skjærehastigheten og mange andre parametere. Typisk er hellingsvinkler der en liten klaringvinkel på noen få grader forblir mellom klargjøringsplanet og kniven .

Hvis denne vinkelen er satt for flatt, skjærer kniven ujevnt, eller områder av den nedre delen av kniven berører den nyklipte overflaten slik at den blir smurt.

Hvis vinkelen derimot velges for stor, vil kniven "rumle" over overflaten og periodiske tykkelsesvariasjoner i kuttet vil forekomme. Hvis hellingsvinkelen er enda større, er sidebelastningen på skjærekanten ekstremt høy og knivkanten kan bryte av.

Klargjøring og oppfølging av prøvene

Biologiske og andre myke materialer krever omfattende forbehandling for å stivne dem og dermed gjøre dem kuttbare. Metodene for denne forbehandlingen som fiksering og innebygging er en del av histoteknologien . For innstøping blir objektet vanligvis helt fuktet i en væske, som deretter blir gjort for å stivne. På denne måten har preparatet gjennomgående en ganske jevn styrke. Typiske innstøpsmedier er parafin , polyetylenglykol , celloidin , gelatin , agar og syntetiske harpikser .

For noen undersøkelser oppnås størkning av materialet som skal kappes ved frysing, f.eks. B. hvis innebygging vil føre til endring i prøven eller forhindre påfølgende farging. Prøver som inneholder vann, må fryses sjokk med en avkjølingshastighet på minst 10 000 K / s ( Kelvin per sekund) slik at vannet stivner i amorf tilstand. Ellers vil det dannes iskrystaller som vil føre til fryseskader i materialet. Seksjonene blir deretter laget på frysende mikrotomer, vanligvis ved -20 ° C.

Etter seksjonering må seksjonen overføres til en bærer for videre behandling (f.eks. Histokjemisk, immunhistokjemisk farging). For lysmikroskopiske preparater brukes lysbilder . Større parafinseksjoner får først flyte på en overflate av vann (45 ° C) og glattes av overflatespenningen . Deretter skyves et lysbilde under kuttet i en vinkel under vannoverflaten og flyttes deretter forsiktig oppover. Den ene kanten av skjæringen fester seg til glasset på grunn av klebemessige krefter og trekkes derved på lysbildet. Det samme prinsippet brukes også for ultratynne seksjoner for elektronmikroskopi , som er for tynne og ustabile for mekanisk løfting. Her festes væskekaret direkte til kniven. Snittene danner en kappebåndet (se bilde av ultramikrotom) og blir deretter fanget av med et fint metallnett .

applikasjon

I histologi (vevsteori) er utarbeidelse av seksjoner et grunnleggende krav for undersøkelse av vevsfunksjoner. Spesielle frysemikrotomer (kryostater) brukes blant annet til rask seksjonsdiagnostikk for å oppnå klarhet om fullstendigheten av fjerningen av en svulst under operasjonen. Basert på resultatene vil det bli tatt en beslutning om hvordan du skal fortsette med operasjonen.

I tillegg brukes mikrotomer til materialanalyser. Eksempler inkluderer lysmikroskopisk eller spektroskopisk undersøkelse av lagsystemer (spesielt mikroskopisk IR-spektroskopi under overføring) eller polarisasjonsmikroskopisk undersøkelse av sfærulitter . For overføringselektronmikroskopi er svært tynne kutt nødvendige for å kunne bestråle dem med elektroner.

I oftalmologien være innenfor omfanget av brytningsoperasjoner kjent som mikrokeratom (et slags Callous plan), eller mer nylig, brukte femtosekundelaseren (også referert til som klaff) til en 150 pm tykk hornhinneklaff som skal kuttes og derved eksponere de underliggende lagene av hornhinnen for en Excimerlaser-operasjon. Denne enheten kalles noen ganger et mikrotom.

Individuelle bevis

1. ^ ^{A b} John Hill: The Construction of Timer, fra den tidlige veksten; Forklart med mikroskop, og bevist fra eksperimenter, i et stort utvalg av slag. 1770, s. 5–11, plate I.
2. ↑ ^{en b c} Gretchen L. Humason: dyrevev teknikker . WH Freeman and Company, 1962, s. 43, kapittel 4 (Microtomes og Microtome Knives).
3. ^ John Quekett: En praktisk avhandling om bruk av mikroskopet . Hippolyte Bailliere, London 1848, s. 306, kapittel XII (Microtomes og Microtome Knives).
4. ↑ Anonym: En mikrotom fra det attende århundre . (PDF) I: Journal of the Royal Microscopical Society , 1910, The Royal Microscopical Society, Oxford GB, s. 779-782.
5. ^ ^{A b} Gilbert Morgan Smith: The Development of Botanical Microtechnique. I: Transactions of the American Microscopical Society 34, nr. 2. 1915, s. 71-129.
6. Hart Peter Harting: Mikroskopet. . F. Vieweg & Sohn, Braunschweig 1859, s. 363–366, seksjon 292.
7. ↑ Erich Hintzsche : Krav og utvikling av mikrotomi . I: Ciba magazine (Basel) . Nei. 8 , 1943, s. 3082-3084 ( PDF ). 
8. ↑ Histologi . I: Microsoft Encarta online, mars 2009.
9. ↑ Detlev Ganten: Håndbok for molekylær medisin . Springer, ISBN 3-540-64552-7 ( Google Books ).
10. ↑ Werner Gerabek, Bernhard D. Haage, Gundolf Keil, Wolfgang Wegner: Enzyklopädie Medizingeschichte . Walter de Gruyter, 2005, ISBN 3-11-015714-4 ( Google Books ).
11. ↑ Se også JE Purkinje: Den mikrotomiske pressen, et uunnværlig instrument for mikroskopiske undersøkelser. I: Arkiv for anatomi, fysiologi og vitenskapelig medisin. 1834, s. 385-390.
12. ↑ J. Purkinje: mikroskop. Anvendelse og bruk i fysiologiske studier . I: Rudolph Wagner (red.): Kort ordbok for fysiologi med hensyn til fysiologisk patologi . Andre bind. Braunschweig 1844, s. 411-441 (Online versjon tilgjengelig fra Google Books - (Den siterte delen er på side 424). 
13. ^ Wilhelm His. I: Encyclopædia Britannica Online. Encyclopædia Britannica, åpnet 24. mars 2009 . 
14. Ios Marios Loukas, Pamela Clarke, R. Shane Tubbs, Theodoros Kapos og Margit Sportwetten: Hans familie og deres bidrag til kardiologi . I: Elsevier (red.): International Journal of Cardiology . 123, nr. 2, Irland, 2008, s. 75-78. doi : 10.1016 / j.ijcard.2006.12.070 .
15. ^ Wilhelm His: Beskrivelse av en mikrotom . (PDF) I: Arkiv for mikroskopisk anatomi , 6, 1870. Verlag Max Cohen & Sohn, Bonn, s. 229–232, panel III, doi: 10.1007 / BF02955980 .
16. ↑ Ole Daniel Enersen: Wilhelm His .
17. ↑ Ernst Mayr: Utviklingen av den biologiske tankeverdenen. Springer, 2002, ISBN 3-540-43213-2 ( Google Books ).
18. ↑ Werner Linß, Werner Linb, Jochen Fanghänel: Histologi: cytologi, generell histologi, mikroskopisk anatomi. Walter de Gruyter, 1998, ISBN 3-11-014032-2 ( Google Books ).
19. ^ Richard Thoma, JF Lyon: Om et mikrotom . I: . Virchow Arch . 84, 1881, pp 189-191.
20. ↑ Klaus Goerttler (red.): Biografisk leksikon for portrettsamlingen til anatomisten Robert Wiedersheim .
21. ↑ ^{a b c d e f g h i j k l m} Klaus Henkel: Cutting with the microtome . Mikrobiologisk forening München e. V., 2006, åpnet 15. februar 2009.
22. ↑ Rudolf Krause: Leksikon om mikroskopisk teknologi . Urban & Schwarzenberg, Berlin 1926 (3. utgave), s. 1528–1548, bind II.
23. ↑ ^{a b c d e f g h i j} Gudrun Lang: Histotechnik. Praktisk lærebok for biomedisinsk analyse. Springer, Wien / New York 2006, ISBN 3-211-33141-7 ( Google Books ).
24. ↑ Stephen Peters: Frossen seksjonsteknikk . Patologiinnovasjoner (Freeze Section Technique Guide and Videos).
25. ↑ Holger Lubatschowski 2007: Laser skjæringen . ( Memento fra 9. oktober 2011 i Internet Archive ) (PDF; 170 kB) WILEY-VCH, Biophotonics, s. 49–51.
26. ↑ ^{a b} Irene K. Lichtscheidl (red.): Lysmikroskopi - teori og anvendelse . I: Lysmikroskopi online - teori og anvendelse. Universitetet i Wien, åpnet 15. februar 2009 (PDF; 897 kB).
27. ↑ A. Turzynski (Ed.): Schnellschnittdiagnostik . Patologi Lübeck, 15. februar 2009.
28. ↑ T. Kohnen (red.): Mikrokeratome . åpnet 15. februar 2009 (Skjematisk beskrivelse av arbeidet med mikrokeratom).
29. ↑ Internet Media Services, Inc. (red.): Forståelse av LASIK . åpnet 15. februar 2009 (beskrivelse av laser in situ keratomileusis (LASIK), inkludert video av en operasjon, engelsk).
30. ↑ Steven H. Schwartz: Geometriske og Visual Optics. McGraw-Hill, 2002, ISBN 0-07-137415-9 ( Google Books ).

weblenker

• Skjæring med mikrotomen
• Video om kutting med mikrotomen på YouTube. Hentet 3. mars 2009.

Denne artikkelen ble lagt til listen over gode artikler 22. mars 2009 i denne versjonen .